Contente

• Principal diferença
• Southern Blotting vs. Western Blotting
• Gráfico de comparação
• O que é Southern Blotting?
• O que é Western Blotting?
• Principais diferenças
• Conclusão

Principal diferença

A principal diferença entre Southern Blotting e Western Blotting é que Southern Blotting é uma técnica usada para detectar um fragmento de DNA específico em uma determinada amostra, enquanto Western Blotting é usado para descobrir uma proteína específica em uma determinada amostra.

Southern Blotting vs. Western Blotting

A mancha é uma técnica usada pelos cientistas para separar diferentes tipos de moléculas de uma mistura ou amostra. Nesta técnica, macromoléculas como ácidos nucléicos (DNA e RNA) e proteínas em uma mistura se movem através de uma placa de gel. Aqui, partículas minúsculas se moverão mais rápido que as maiores. Essas moléculas são pressionadas contra a superfície de uma membrana imobilizada que transfere as moléculas para a membrana. Existem diferentes tipos de manchas com base na detecção de material específico, isto é, manchas no sul, manchas no norte e manchas no oeste. Southern blotting é o tipo de mancha que é usado para detectar DNA, enquanto a mancha ocidental é usada para descobrir proteínas. Southern blotting foi desenvolvido por Edward M. Southern em 1975. Portanto, é conhecido como Southern blotting. Por outro lado, o Western Blotting foi desenvolvido pelo grupo de George Stark na Universidade de Stanford em 1979. Esse nome foi usado para combinar com o Southern Blotting. O Southern blotting é usado para descobrir uma sequência de DNA específica, enquanto o Western Blotting é usado para descobrir uma sequência específica de aminoácidos ou proteínas.

Gráfico de comparação

O que é Southern Blotting?

Southern blotting é o método de mancha mais antigo que foi dado por Edwin Southern, assim denominado como Southern blotting. É usado para descobrir uma sequência específica de DNA em uma determinada amostra ou mistura. As etapas envolvidas durante a transferência do sul são eletroforese, transferência e detecção de sequências específicas. Primeiro de tudo, o DNA é fragmentado com a ajuda de enzima de restrição específica. Em seguida, os fragmentos de DNA desejados são separados por eletroforese em gel. Estes fragmentos são desnaturados com a ajuda de uma solução alcalina, por exemplo, NaOH, etc. para separar as duas cadeias de DNA. Esses fragmentos de DNA de fita simples foram transferidos para uma membrana através do processo de transferência. Esse DNA ligado à membrana é então tratado com uma sonda marcada. Esta sonda será anexada à sua cadeia complementar no DNA da membrana que pode ser visualizada por autoradiograma etc.

O que é Western Blotting?

O método Western blotting foi inventado pelo grupo de George Stark na Universidade de Stanford que é usado para identificar uma sequência específica de aminoácidos na proteína. Também é conhecido como borrão de proteína ou imunotransferência. As etapas durante a transferência ocidental são eletroforese, transferência e detecção de proteínas específicas. Antes de tudo, homogeneize a mistura. Em seguida, separe a molécula de interesse com a ajuda da eletroforese. Transfira essas moléculas na membrana e identifique a proteína específica usando uma sonda específica.

Principais diferenças

1. Uma técnica usada para descobrir uma sequência específica de DNA em uma dada mistura é conhecida como Southern Blotting, enquanto que uma técnica usada para descobrir uma sequência específica de aminoácidos da proteína em uma dada mistura é conhecida como Southern Blotting.
2. Southern blotting foi desenvolvido por Edward M. Southern em 1975, conhecido como Southern blotting. Por outro lado, o western blotting foi desenvolvido pelo grupo de George Stark na Stanford University em 1979.
3. Southern blotting é usado para descobrir uma sequência específica de DNA. Por outro lado, o Western blotting é usado para descobrir uma sequência específica de aminoácidos ou proteínas.
4. O Southern Blotting trabalha com o princípio da hibridação no outro lado; O Western Blotting funciona com base no princípio do método de imunodetecção ou na interação antígeno-anticorpo.
5. Um DNA de fita simples ou, às vezes, RNA é usado como sonda em Southern blotting, por outro lado, na western blotting, anticorpos primários e secundários são usados ​​como sonda.
6. A eletroforese em gel de agarose é usada na transferência sul, enquanto o gel SDS PAGE / poliacrilamida é usado para separar proteínas na transferência ocidental.
7. O Southern blotting segue o procedimento de transferência capilar, por outro lado; Western Blotting segue o procedimento de transferência elétrica.
8. Durante a transferência de Southern, a amostra precisa ser desnaturada, enquanto, durante a transferência de Western, a amostra deve estar em seu estado nativo.
9. Por outro lado, nenhuma mancha como o bloqueio está envolvida na transferência sul, durante a transferência ocidental, locais inespecíficos de anticorpos são bloqueados no papel de nitrocelulose com a ajuda de leite em pó ou albumina de soro bovino (BSA).
10. Os métodos de rotulagem comuns que são usados ​​na mancha do sul são o uso de corantes cromogênicos ou marcação radioativa ou fluorescente, etc.
11. Detecção de luz, autorradiografia e alterações de cor são usadas como métodos de detecção no sul da mancha, enquanto métodos de detecção na mancha ocidental são alterações na cor e detecção da luz, etc.
12. O Southern blotting é usado na detecção de DNA, testes de paternidade, detecção de DNA, identificação de vítimas, identificação de criminosos, localização de agentes infecciosos e identificação de mutações ou rearranjos genéticos, etc. Por outro lado, a transferência ocidental é usada para encontrar o número de proteínas em um mistura, para detectar a presença de HIV, vírus e bactérias etc. no soro, para descobrir proteínas defeituosas e usadas como uma medida definitiva para herpes, hepatite B, doença de Lyme e doença de Creutzfeldt-Jacob, etc.

Conclusão

A discussão acima resume que a transferência Southern é a técnica de transferência mais antiga usada para descobrir um segmento de DNA específico em uma amostra, enquanto a transferência Western foi descoberta posteriormente e usada para identificar uma sequência específica de aminoácidos ou uma proteína específica.